荧光定量PCR结果分析
一般而言，荧光扩增曲线可以分成三个阶段：荧光背景信号阶段、荧光信号指数扩增阶段和平台期。在荧光背景信号阶段，扩增的荧光信号被荧光背景信号所掩盖，无法判断产物量的变化;在平台期，扩增产物已不再呈指数级增加，PCR终产物量与起始模板量之间没有线性关系，无法计算起始模板拷贝数。因此只有在荧光信号指数扩增阶段，PCR产物量的对数值与起始模板量之间存在线性关系，故选择在这个阶段进行定量分析。为了定量方便，在实时荧光定量PCR 技术中引入了几个重要的概念：扩增曲线、荧光阈值、CT值。
(1)扩增曲线
图1：qPCR扩增曲线
注：
横坐标：代表扩增循环数;
纵坐标：代表荧光强度，每个循环进行一次荧光信号收集。
(2)荧光阈值(Threshold)
在荧光扩增曲线上人为设定的一个值，它可以设定在荧光信号指数扩增阶段任意位置上，但一般荧光阈值的设置是PCR反应前3-15个循环荧光信号标准偏差的10倍。
(3)CT值
每个反应管内的荧光信号到达设定阈值时所经历的循环数。每个模板的Ct值与该模板的起始拷贝数的对数存在线性关系，起始拷贝数越多，Ct值越小。利用已知起始拷贝数的标准品可作出标准曲线，其中横坐标代表起始拷贝数的对数，纵坐标代表Ct值。因此，只要获得未知样品的Ct值，即可从标准曲线上计算出该样品的起始拷贝数。同时，对于荧光PCR实验来说，CT值也是判读样品阴阳性的重要指标。
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