|
植物蛋白互作验证 BiFC/LCI
双分子荧光互补 (Bimolecular Fluorescence Complementation, BiFC)是一项可直观、快速判断目标蛋白在活细胞中的定位和相互作用的新技术。将蛋白在某些特定的位点切开，形成不发荧光的N和C端2个多肽，称为N片段(N-fragment)和C片段(C-fragment)。这2个片段在细胞内共表达或体外混合时，不能自发地组装成完整的荧光蛋白，在该荧光蛋白的激发光激发时不能产生荧光。但是，当这2个荧光蛋白的片段分别连接到1组有相互作用的目标蛋白上，如果目标蛋白质之间有相互作用，则在激发光的激发下，产生该荧光蛋白的荧光。反之，若蛋白质之间没有相互作用，则不能被激发产生荧光。
技术原理
萤火虫荧光素酶片段互补图像技术（LCI）是近年来形成的研究蛋白互作的新技术，把2个目标蛋白分别连接于萤火虫荧光素酶的C端和N端。如果2个蛋白互作，N段和C端接近形成有活性的荧光素酶。基于烟草瞬时表达的LCI技术将LCI技术与烟草瞬时表达相结合，在研究植物蛋白的相互作用中，可以实现活体细胞内实时、定量分析；不受植物自发荧光的干扰；而且操作简单，不需要裂解细胞提取蛋白质，可以很好的反映植物生理条件下蛋白的互作状态。
实例图片
服务要求
1.基因序列或构建好的质粒。
2.提供新鲜或保存完好的植物组织或RNA。
服务基本流程
1.基因克隆，BiFC/LCI载体构建；
2.转烟草；
3.观察；
4.实验报告。
交付数据及材料
1.完整的实验报告，包括原始数据、详细的实验步骤及整理结果；
2.构建好的质粒及农杆菌菌株。
|
