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16S rDNA文库构建及细菌群落多样性分析
细菌16S rDNA是细菌染色体上编码16S rRNA的DNA序列，存在于所有细菌染色体基因中，其序列能够显示细菌间不同分类等级水平上的特异性，适用于细菌亲缘关系的研究，并可作为测量细菌进化和亲缘关系的良好工具，同时可以利用可变区序列的差异对不同菌属、菌种的细菌进行分类鉴定。通过构建细菌16S rDNA文库、细菌16S rDNA序列的DGGE变性梯度凝胶电泳技术和RFLP限制性片段长度多态性技术均可以对某一特定环境中细菌群落结构和细菌多样性进行分析。
细菌16S rDNA文库构建
使用PCR方法扩增特定环境样品中混合细菌16S rDNA，使用TA克隆方法构建细菌16S rDNA文库，挑选阳性克隆测定细菌16S rDNA部分序列，并与GenBank中已知序列进行同源性比较，获得特定环境中的细菌群落结构和细菌多样性信息。
RFLP限制性片段长度多态性
RFLP(Restriction Fragment Length Polymorphism,限制片段长度多态性)，是用特异性引物对混合微生物群体DNA提取物进行PCR扩增，然后用适当的限制性内切酶对扩增产物进行消化，由于序列的差异，呈现酶切图谱的 DNA多态性。该方法已被广泛用于基因组遗传图谱构建、基因定位以及生物进化和分类的研究。T-RFLP技术依据细菌16S rRNA基因保守区设计通用引物，以待分析样品DNA为模板进行PCR扩增，所得到的PCR产物采用特定的的限制性内切酶进行酶切。由于在细菌之间16S rRNA序列中核苷酸序列的差异，酶切后会产生很多不同长度的限制性片段。通过检测分析这些酶切片段大小即可反应微生物群落组成情况。
服务要求
1.请提供基因组DNA、经菌种分离后带有单菌落的新鲜平板或斜面。
2.基因组DNA的浓度≥10 ng/μl，总体积≥20 μl，且无明显降解；平板或斜面应长有分离的单菌落。
3.由于革兰氏阳性细菌或厌氧菌、放线菌等特殊菌株，请在服务委托书中加以说明。
4.环境样品及其中的细菌是否具有致病性和潜在危险，如您对样品具有一定的致病性或均有潜在的危险，请您提供样本DNA。
5.请您提供选哪些方法细菌多样性进行分析。
服务报告内容
我们提供给您DNA电泳检测图，需测序样本的测序锋图，序列比对结果及完整的结果分析报告。
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