背景说明
荧光素酶(Luciferase)是生物体内催化荧光素或脂肪醛氧化发光的一类酶的总称,来自于自然界能够发光的生物。目前,以北美萤火虫(Photinus pyralis)来源的荧光素酶基因应用的最为广泛。利用荧光素酶与底物结合发生化学发光反应的特性,把感兴趣的基因转录的调控元件克隆在萤火虫荧光素酶基因的上/下游,构建成荧光素酶报告质粒。然后转染细胞,经适当刺激或处理后裂解细胞,测定荧光素酶活性。通过荧光素酶活性的高低判断刺激前后或不同刺激对感兴趣的调控元件的影响。
服务流程:
实验材料确认—重组质粒制备—材料选择—转化/染—裂解细胞—荧光检测—数据分析
此检测适用于:
1、启动子结构分析:将启动子区域序列(通常2k左右)进行分段截短,或对特定位点进行突变,再分别构建入荧光素酶报告载体,检测其启动子活性。
2、启动子SNP分析:一些基因的启动子区域存在单核苷酸多态性,可运用萤光素酶报告系统分析其相对活性。
3、验证特定转录因子同其调控序列的作用:将该序列(通常为启动子区域)插入报告基因载体,同时在实验细胞中共转其转录因子,可分析转录因子是否提高萤光素酶活性。
4、验证启动子活性:将待测启动子构建至荧光素酶基因的上游,检测启动子的活性。
客户提供:
提供转录因子/启动子的核酸序列或登录号。
交付内容:
1、重组载体的全序列信息和注释信息;
2、重组载体的酶切图谱;
3、重组载体的测序结果;
4、重组载体:一份质粒、一份大肠杆菌菌液(25%甘油菌);
(上述4点是由我司构建载体。)
5.完整的实验报告,含3组双荧光酶活图片。
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