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荧光素酶报告基因系统是以荧光素（luciferin）为底物来检测萤火虫荧光素酶（fireflyluciferase）活性的一种报告系统。荧光素酶可以催化luciferin氧化成oxyluciferin，在luciferin氧化的过程中，会发出生物荧光（bioluminescence），可通过荧光测定仪设备测定luciferin氧化过程中释放的生物荧光，常应用于启动子转录活性调控及miRNA靶基因验证等方向研究。
启动子与转录因子相互作用检测
转录因子是一种具有特殊结构、行使调控基因表达功能的蛋白质分子，也称为反式作用因子。某些转录因子仅与其靶启动子中的特异顺序结合，这些特异性的序列被称为顺式因子。转录因子的DNA结合域和顺式因子实现相互结合，从而对基因的表达起抑制或增强的作用。荧光素酶报告基因实验是检测这类转录因子和其靶启动子中的特异顺序结合的重要手段。
miRNA与3’UTR相互作用检测
miRNAs 与靶基因的3' UTR区域特异结合后调节靶基因的表达。当3' UTR靶标序列融合在一个荧光素酶报告基因下游并在体外表达时，miRNA通过与下游3' UTR特异结合从而调节荧光素酶的表达。通过分析荧光素酶的活性，间接了解miRNA的靶标调控作用和特异性。
荧光素酶报告基因的检测流程
细胞篇
1、重组质粒制备: 制备含有待检测基因-Luc/Rluc的重组质粒；
2、细胞系选择: 根据实验需要选择细胞株，通常选择转染效率较高的293T细胞或原代细胞等；
3、共转染: 将带有Luc/Rluc标记的报告基因和目的基因进行共转染，设置不同的检测时间点，一般为24h/48h；
4、外界干预: 转染后，可进行物理/化学/病毒等的相应刺激；
5、细胞处理: 采用进口/国产双荧光素酶检测试剂盒依照protocol操作；
6、荧光检测: 使用GENios Pro 酶标仪或具有类似检测功能的设备进行荧光强度检测。
烟草叶片篇
1、制备重组质粒
2、农杆菌转化及培养：质粒转化比例需要摸索。转化后需过夜培养，OD600达到0.8以上即可；
3、利用无针头注射器注射叶片，（先用针头在叶片上扎个小孔）（注射烟草顶端以下第3-5片叶片）；
4、暗培养1d，光照培养2d;
5、取叶片进行打孔，8mm-1.5cm即可; 6、在2mL的EP管中加入预冷的小钢珠，放入3-4片烟草叶盘并加入适量的液氮，使用仪器进行研磨破碎（45Hz，30s），加入100μL裂解液，10000-16000rpm离心2min，取上清20μL进行检测。
7、检测：方法同动物细胞。
实验流程：
服务特色
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经验丰富
生物信息学家协会协助分析启动子区域，精准定位，多方实验。
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资源丰富
完善的载体资源库和启动子资源库，能够方便、快捷的为客户提供便利服务。
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一站式服务
提升客户体验是我们不懈的追求，立体化的上下游实验体系让您省心。
客户提供
1. 启动子转录活性调控：提供转录因子名称及ID、靶基因名称及ID。
2. miRNA靶基因验证：提供miRNA名称、物种信息、靶基因名称及ID。
3. 实验细胞，如无特殊要求，默认使用293T细胞。
4. 如有基因模板或构建好的转录因子表达载体，可以提供。
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